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2021年11月13日，客服中心反饋廣州某公司生產(chǎn)一款新型牙膏，希望上市前進(jìn)行產(chǎn)品功效檢測(cè)，情況如下：

客戶(hù)背景

廣州某公司研發(fā)清潔的產(chǎn)品，在10月份研發(fā)出一份牙刷，需要進(jìn)行功效實(shí)驗(yàn)初步測(cè)試。

樣品名稱(chēng)

金銀花益生菌潔齒膏

客戶(hù)需求

抗敏功效檢測(cè)。

解決方案

1. 檢測(cè)樣品信息

1.1測(cè)試樣品：稱(chēng)取樣品0.3264 mg，加入2.94 mL DMEM培養(yǎng)基，配成濃度為10%（w/w）。隨后用DMEM培養(yǎng)基依次稀釋至測(cè)試濃度。

2. 對(duì)照組信息

2.1 陽(yáng)性對(duì)照（PC）：1 μg/mL地塞米松

稱(chēng)取100 mg地塞米松，加入1 mL甲醇溶解，即為100 mg/mL地塞米松儲(chǔ)備液，再使用超純水稀釋為1 μg/mL的工作濃度。

3. 試驗(yàn)接受標(biāo)準(zhǔn)

NC（陰性對(duì)照組）與M（模型組）相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t檢驗(yàn)），M（模型組）與PC（陽(yáng)性對(duì)照組）相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t檢驗(yàn)）

3.1實(shí)驗(yàn)原理

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)使用LPS誘導(dǎo)的人牙齦上皮細(xì)胞作為體外炎癥細(xì)胞模型，通過(guò)ELISA試劑盒檢測(cè)細(xì)胞上清液中分泌的炎癥因子（IL-1α），從而評(píng)估待測(cè)樣本的抗炎抗敏作用。

參考文獻(xiàn)：

[1] Basso,  G F. , Soares, et al. Effect of LPS treatment on the viability and chemokine synthesis by epithelial cells and gingival fibroblasts. 

[2] Giacomo Picciolo, Federica Mannino, Natasha Irrera, ,Letteria Minutoli, et al. Reduction of oxidative stress blunts the NLRP3 inflammatory cascade in LPS stimulated human gingival fibroblasts and oral mucosal epithelial cells[J]. Biomedicine & Pharmacotherapy, 2021, 146: 112525.

3.2實(shí)驗(yàn)方法

CALT/TM/SOP269-01人牙齦上皮細(xì)胞抗炎試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。

4. 實(shí)驗(yàn)材料

4.1 細(xì)胞系：人牙齦上皮細(xì)胞     來(lái)源：北納創(chuàng)聯(lián)，傳代數(shù)：12

4.2 培養(yǎng)液：含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基（FBS，Gibco，Lot：2275120）

4.3 測(cè)試條件：培養(yǎng)箱溫度37±1℃，濕度90±5%，CO2 5±1%

4.4 脂多糖（LPS）：用超純水稀釋至1 mg/mL儲(chǔ)備液，-20℃保存（Lot：20211025）

4.5 MTT溶液：用PBS將MTT配制成濃度為5 mg/mL的MTT儲(chǔ)備液，使用0.22μm的針頭濾器過(guò)濾除菌，-20℃保存（Lot：20210924）。

4.6 IL-1α ELISA試劑盒，購(gòu)自欣博盛生物，貨號(hào)：EHC176，Lot：H211103-176a。

5. 試驗(yàn)步驟

5.1 細(xì)胞毒性篩查

5.1.1將培養(yǎng)的細(xì)胞接種于96孔板中，0.8-1.0×104個(gè)/100 μL/孔，然后，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24 h。

5.1.2去除原培養(yǎng)液，每孔加入100 μL不同濃度樣品稀釋液，在培養(yǎng)箱中暴露24±0.5 h。

5.1.3各孔中加入20 μL MTT溶液，在37℃下孵育3 ±0.5 h。然后去除MTT溶液，各孔中加入100 μL DMSO，避光振蕩10-15 min后在570 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值。

5.2 抗炎測(cè)試

5.2.1 常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞，將細(xì)胞以密度為2.0～3.0×105個(gè)/mL/孔接種于12孔板，返回培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24h。

5.2.2取出培養(yǎng)板，棄去孔中原培養(yǎng)液，陰性對(duì)照（NC）加入DMEM培養(yǎng)液，模型對(duì)照組（M）加入LPS（10 μg/mL）的DMEM培養(yǎng)液，樣品組（TA）每孔加入LPS（10 μg/mL）以及含不同濃度的測(cè)試樣品的DMEM培養(yǎng)液，陽(yáng)性對(duì)照組（PC）每孔加入LPS（10 μg/mL）以及含地塞米松（1 μg/mL）的DMEM培養(yǎng)液，每組3個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)24±1 h。

5.2.3 收集上清液，-80℃保存，細(xì)胞因子采用ELISA試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

6. 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS進(jìn)行分析，并以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，如果p<0.05考慮差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

6.1細(xì)胞活性以空白對(duì)照組（Control）細(xì)胞活性為100%，計(jì)算各組相對(duì)細(xì)胞活性（Viability）。

客戶(hù)反饋

客戶(hù)對(duì)于結(jié)果很滿(mǎn)意并且希望后期的研究樣品還可以繼續(xù)合作，協(xié)助完成其他產(chǎn)品的研發(fā)。